在生物制藥領域，無菌過濾工藝是確保最終產品質量和安全性的關鍵環(huán)節(jié)之一。其中，用于去除細菌和控制生物負荷的除菌過濾系統(tǒng)一直是無菌過濾工藝中的重要環(huán)節(jié)。
PUPSIT定義
根據(jù)EU 新版 GMP 的相關規(guī)定“8.87 The integrity of the sterilised filter assembly should be verified by integrity testing before use (pre-use post sterilisation integrity test or PUPSIT), to check for damage and loss of integrity caused by the filter preparation prior to use.”
PUPSIT，即“使用前、滅菌后完整性測試”（Pre-Use Post-Sterilization Integrity Test），是無菌制藥工藝中的一項重要測試措施。
由于滅菌過程可能會對過濾器產生影響，如導致微小破損、孔徑變化，或引入“掩蓋缺陷”的風險，PUPSIT幫助制藥企業(yè)在生產啟動之前確認過濾器是否能有效地過濾微生物和其他顆粒，確保產品的最終無菌性。
實施要點
1. 測試時機與流程設計
嚴格時序：必須在過濾器完成滅菌（如濕熱滅菌、輻照滅菌）后，且在實際使用（如藥液過濾、無菌工藝）前進行，避免滅菌后二次污染或操作損傷。
無縫銜接：若滅菌后無法立即測試（如過濾器已安裝于系統(tǒng)），需確保測試前系統(tǒng)處于密閉狀態(tài)，防止外界污染。
2. 滅菌方法兼容性
濕熱滅菌（SIP）：需驗證高溫高壓對濾膜（如PES、PVDF）的影響，避免膜孔徑變形或密封件老化。
輻照滅菌：注意γ射線或電子束可能降低濾膜機械強度，需通過完整性測試確認無損傷。
環(huán)氧乙烷（EO）滅菌：需徹底解析殘留氣體，避免影響測試結果（如擴散流測試干擾）。
3. 完整性測試方法選擇
起泡點測試（Bubble Point）：適用于膜孔徑較大（≥0.2μm）的除菌過濾器，需設定滅菌前后的閾值（如0.2μm濾膜起泡點≥3.5 bar）。
擴散流/前進流測試（Diffusion Flow）：更敏感，適用于小孔徑或多層濾膜，需根據(jù)濾膜材質和滅菌條件校準標準值。
壓力衰減測試（Pressure Hold）：適用于在線測試，需確保系統(tǒng)密閉性（如管路、接頭無泄漏）。
4. 測試系統(tǒng)設計
在線測試 vs. 離線測試：
在線測試：直接在生產系統(tǒng)中進行，需驗證測試設備（如完整性測試儀）與工藝管路的兼容性。
離線測試：適用于小型或獨立過濾器，需確保拆卸-測試-重新安裝過程的無菌性。
自動化集成：優(yōu)先采用自動化測試設備，減少人為操作誤差，確保數(shù)據(jù)完整性（如電子記錄符合ALCOA+原則）。
5. 驗證與接受標準
滅菌前后對比：需建立滅菌前（出廠）與滅菌后（PUPSIT）的完整性測試數(shù)據(jù)基線，確認滅菌過程未導致性能漂移。
接受標準：依據(jù)過濾器廠家標定值，結合工藝驗證數(shù)據(jù)設定（如擴散流≤10 mL/min·cm2）。
失敗處理：若測試失敗，需啟動偏差調查（是否為滅菌損傷、安裝不當或測試誤差），并更換過濾器。
風險評估與關鍵控制
風險點：滅菌參數(shù)超限（如溫度過高）、過濾器安裝不當（如O型圈損壞）、測試環(huán)境（如非潔凈區(qū)操作）。
控制措施：通過工藝驗證（如滅菌循環(huán)驗證）、操作SOP培訓、環(huán)境監(jiān)控（如粒子計數(shù)）降低風險。
法規(guī)與文件要求
GMP/FDA合規(guī)：符合FDA《無菌工藝指南》、EU GMP Annex 1（2022）要求，明確PUPSIT為強制步驟。
?歐盟GMP附錄1：2022年發(fā)布的新版附錄1明確要求，在沒有顯著工藝限制（如溶液體積較小）的情況下，制藥企業(yè)必須在使用前對滅菌后的除菌過濾器進行PUPSIT測試。這不僅是為了防止微生物污染，還因滅菌過程可能導致濾器的完整性下降，從而影響藥品的無菌質量。
?美國FDA：FDA的相關指南雖然未明確要求所有情況下必須執(zhí)行PUPSIT，但強調根據(jù)產品特性進行風險評估，并在必要時執(zhí)行完整性檢測。對于那些無法在滅菌后實施PUPSIT的產品，需基于科學依據(jù)采取其他風險控制措施。
?WHO和PIC/S：全球化的GMP指南如WHO和PIC/S同樣支持PUPSIT，特別是針對出口或跨國銷售的無菌藥品，要求嚴格執(zhí)行PUPSIT的流程，以確保最終產品質量達到國際標準。
文件記錄：需完整記錄滅菌參數(shù)、測試結果、操作人員、設備編號等信息，支持產品批次放行。
審計重點：檢查測試數(shù)據(jù)趨勢分析、偏差記錄、過濾器更換頻率是否合理。
典型案例應用
注射液除菌過濾：在線PUPSIT確保藥液過濾前過濾器完整性。
生物反應器進氣過濾器：滅菌后測試防止細胞培養(yǎng)污染。
無菌包裝器械：測試呼吸袋過濾器是否在EO滅菌后仍維持無菌屏障。
總結
PUPSIT是保障無菌工藝安全的核心環(huán)節(jié)，需通過科學的驗證、嚴格的流程控制和合規(guī)的文件管理實現(xiàn)。實施時應結合具體工藝特點（如滅菌方式、過濾器類型），確保測試結果的可靠性與重現(xiàn)性。
英文 
西語
阿拉伯語
日語
